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不推薦你用直標一抗的理由只有一個,推薦你用的理由卻很多......
發表者:北京博奧森生物      發表時間:2022-4-21

免疫學實驗方法為相當多生命科學問題的解決提供了重要的解決方案。從WB到IHC,從IP到FC,抗體已經在蛋白質科學、毒理學和病理學等相關的研究中,占據了無可動搖的核心地位。傳統免疫學實驗方法通常需要使用“二抗”作為靶標抗體和檢測標記間的轉換器,這樣一類方法被形象地稱為“間接免疫法”。這樣做的主要好處是可以在一定程度上放大靶標特異性的信號。同時,由于抗體標記操作可以大批量進行,二抗的引入在一定程度上可以降低標記過程的成本。


但是,由于樣本中內源性Ig的影響,應用二抗往往會產生較多的非特異性信號。這一現象在組織或細胞培養用血清和一抗種屬來源相同時格外嚴重,嚴重時會造成靶標信號湮滅。為了去除組織中內源性Ig的干擾,獲取動物組織前進行心臟灌注往往是必要的。但是灌注過程對操作者的實驗技術和試劑的清潔性具有較高的要求,不適當的灌流往往會造成組織內栓塞形成而降低灌流效果,有時甚至會造成樣本中蛋白質降解導致實驗失敗。使用二抗同時意味著增加了孵育次數,這使得實驗的時間被延長。



隨著時間的推移,越來越多的人們意識到:直接標記一抗可以解決以上問題。直標一抗可以直接結合靶標而不受內源抗體的影響,毫無疑問,這降低了背景信號干擾,提升了對樣本前期準備階段的容錯率(包括清洗和灌流等)。此外,直標一抗在應用于流式細胞分選時,大大降低了二抗非特異性吸附導致細胞錯分的幾率。直標一抗孵育后,簡單清洗即可直接進行下一步檢測,節省實驗步驟與寶貴的實驗時間,并降低失誤的幾率。因此,越來越多的實驗室研究人員(特別是國外高端實驗室),已經開始逐步將傳統的間接免疫方法置換為一抗直標方法。使用直標一抗發表的各類文章已獲得學術界的廣泛接受。

顯然,直標一抗的價格往往略高于未標記的單抗。但是考慮到節省掉的二抗和時間成本,有限的一抗成本提升顯得微不足道。況且,直接標記法避免了二抗帶來的非特異性信號風險,這意味著直標一抗可以避免掉相當多的假陽性試驗結果,因此獲得到的數據更有真實性以及說服力。盡管對于一小部分豐度極低的靶標來說,間接免疫法帶來的信號放大仍提供了一些優勢。但是近期正在高速發展的酪酰胺信號放大技術(TSA技術)能夠更加根本地解決這個問題。可以預見,HRP直標一抗與TSA技術的聯合使用,將會在不犧牲分辨率和信號強度的前提下進一步提高樣本檢測的信噪比,從而帶來蛋白組織或亞細胞分布解析覆蓋度和精度的再一次巨大的飛躍!


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標記服務介紹

博奧森生物可對抗體、蛋白、多肽、小分子化合物等多種物質進行常規標記物標記。目前可標記的熒光物質包括:

酶標記物:堿性磷酸酶 (AP/ALP),辣根過氧化物酶 (HRP);

常規熒光素與熒光蛋白:FITC,Rhodamine B (RBITC),藻紅蛋白 (PE),別藻藍蛋白 (APC);

Cy系列熒光素:Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7;

AF系列熒光素:AF350, AF488, AF555, AF594, AF647, AF680, AF750;

其它:生物素 (Biotin),膠體金標記(Co-Au);

熒光雙標記:

PE-Cy熒光素系列:PE-Cy3, PE-Cy5, PE-Cy5.5, PE-Cy7;

APC-Cy熒光素系列:APC-Cy3, APC-Cy5, APC-Cy5.5, APC-Cy7;

PerCP-Cy熒光素系列:PerCP-Cy3, PerCP-Cy5, PerCP-Cy5.5, PerCP-Cy7。


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