同型對照是什么？
同型對照 (Isotype control) 是一種與一抗保持相似特性但缺乏特異性靶標的抗體。在流式實驗中，同型對照作為陰性對照，可以區分特定抗體信號與非特異性背景染色，能夠排除干擾因素以確保實驗結果的準確性。同型對照還可以用于設定流式細胞儀的電壓，并有效節約實驗成本。
產生背景染色的原因？
1.抗體與靶細胞的 Fc 受體、內源性酶、死細胞等因素的非特異性結合產生的背景染色。
2.細胞本身的熒光產生的背景染色。
3.流式儀器產生的背景染色。
圖1. HepG2 和 A549 細胞通過使用抗體 Caspase-3 (bs-0081R-FITC) 進行流式細胞檢測，藍色為空白對照，黃色為同型對照，綠色為特異性一抗。流式實驗中根據同型對照設置陰性閾值。
什么情況下應使用同型對照？
同型對照也不是適用于所有情況。同型對照僅能檢測不由表位引起的非特異性結合，而相似表位不同抗原，或不同表位相同抗原產生的交叉反應就不能被同型對照檢測。在以下情況中，實驗人員應使用同型對照以確保流式實驗的準確性：
1.實驗人員流式實驗經驗較少時應使用同型對照;2.進行胞內流式實驗，包括胞內因子，趨化因子，蛋白信號等應使用同型對照;3.使用不常見或特異性不高的抗體時應使用同型對照。
如何選擇同型對照？
在實驗中選擇的同型對照需要與一抗的特性相匹配。合適的同種型對照應與一抗的宿主種族、Ig亞型、偶聯物、輕鏈和工作濃度相同。在流式實驗中，選擇合適的同型對照可以有效排除干擾因素，實現更精確的數據分析。而選用 PBS 作為空白對照則達不到同樣的效果，甚至可能誤導試驗結果。
流式檢測中的常用同型對照
|
抗體名稱 |
標記熒光素 |
貨號 |
|
Mouse IgG1 |
FITC |
|
|
PE |
||
|
PerCP |
|
Mouse IgG2a |
FITC |
|
|
PE |
||
|
PerCP |
|
Mouse IgG2b |
FITC |
|
|
PE |
||
|
PerCP |
|
Mouse IgG |
FITC |
|
|
PE |
||
|
APC |
||
|
AF488 |
||
|
AF594 |
||
|
AF647 |
||
|
CY3 |
||
|
CY5 |
|
Rat IgG |
FITC |
|
|
PE |
||
|
APC |
||
|
AF488 |
||
|
AF594 |
||
|
AF647 |
||
|
CY3 |
||
|
CY5 |
|
Rat IgG |
FITC |
|
|
PE |
||
|
APC |
||
|
AF488 |
||
|
AF594 |
||
|
AF647 |
||
|
CY3 |
||
|
CY5 |
