發表者：北京博奧森生物 發表時間：2016-2-15
眾所周知，要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達量的相對多少，前提條件是等量的蛋白上樣，才有比較的基礎。特別是在表達量不高時，上樣量的差別就很可能影響結果的分析。所以需要內參做對比。
內參即是內部參照（Internal Control），對于哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白(Housekeeping Proteins)，它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。在Western Blotting 實驗中，除了需要進行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上樣電泳、轉膜、靶蛋白抗體孵育、顯色等步驟以外，還需要進行內參的檢測，以校正蛋白質定量、上樣過程中存在的實驗誤差，以保證實驗結果的準確性。
有我北京博奧森生物技術公司自主研發的β-Actin肌動蛋白（抗體）貨號：bs-0061R。
特點優勢
1.經親和層析純化的濃縮液（或凍干粉），該抗體質量超過國外任何公司的同種產品；
2.用于Western Blotting為非常清晰的一條帶稀釋比達1：400；
3.用于免疫組化表達位置準確，特異性強、效價高；
4.分子量：42Kda，根據需要可提供各種不同的包裝；
5.IgG含量為100μg/0.2ml 500ug/1ml；
6.價格僅為0.1ml/400.00元：0.2ml/650.00元人民幣；
7.只需4℃保存運輸，有效期：-20℃液體長達兩年（凍干粉狀態長達5年以上）；
8.產品費用低 ，性能穩定、質量可靠、易于保存；
9.該抗體適用廣泛，可用于人、羊、狗、豬、牛、兔、雞和大、小鼠等動物種屬蛋白檢測；
在國外發表的文章中，Western Blotting 實驗結果須進行內參校正已成為一種慣例。但是，國內仍有不少科研人員在Western Blotting實驗中忽略了內參的使用，將蛋白濃度測定作為規范需相互比較的各種樣品間上樣量等同的唯一方法。然而各種蛋白質濃度定量方法，都存在局限性，不能完全準確的確定各種樣品的準確蛋白濃度。 蛋白質定量以后進行電泳時需要等量上樣，此步驟也存在操作誤差。在Western blotting實驗時使用內參，即可簡便地對定量和上樣步驟產生的誤差進行校正。此外使用內參可以作為空白對照，檢測蛋白轉膜情況是否完全、整個Western Blot顯色或者發光體系是否正常。
實驗結果分析其實很簡單：如果樣品蛋白量有限，只夠進行一次電泳轉膜實驗時，分別檢測樣品的內參量和目的蛋白量。將各樣品目的蛋白量分別除以其內參含量，得到的數值即為內參校正后的各樣品中目的蛋白相對含量，再用此數值進行樣品間的比較和分析，得到目的蛋白含量在不同樣品間的實際變化結果。如果樣品量充分，可以先檢測內參，觀測樣品間內參顯色條帶是否一致，根據差異大小調整各樣品的上樣量重新進行Western Blotting實驗，至內參量一致為止；若內參一致，即可進行不同樣品間目的蛋白表達變化分析。這樣雖然麻煩一點，但是可以保證結果更有說服力，更可信。畢竟我們的實驗是一種嚴謹的工作。
