本期導讀：樣本的制備是IHC實驗成功的前提條件。樣本完成石蠟包埋后，需要成約3-4um的薄片。本文主要介紹了切片小技巧及過程中容易出現的16種問題（點擊獲取全部列表）進行了一一分析。
切片小技巧
① 組織切片，舊刀修片，新刀切片。
②切片厚度3-4μm（淋巴結、扁桃體、鼻咽、扁桃體2-3μm；脂肪5-6μm）
③切片毛筆應順著刀背往刀鋒掃。
④切片動作輕，用力均勻。
⑤室溫、冷凍等溫度要適宜，易于切出薄片。
⑥刀片鋒利，切片角度5°最佳，切片平整無褶皺和收縮。
⑦切片方向：纖維、肌肉走向與切片平行；原則為軟→硬，易→難，主→次。
⑧蠟塊表面有鈣點，應20%HCL表面泡1-2h，水洗后切。
⑨切片人員應細心操作，防劃傷，切后維護保養機器。
?切片光面朝下展片、撈片。
?避免切片被污染。
?攤片水溫利于展平又不熔化，必要時用20%酒精攤片。
?用鑷子輔助將組織貼在玻片合適的位置。
?細小組織（穿刺、內鏡小標本）可以多貼幾個。
?玻片干凈，防止脫片（血塊、腦組織、脂肪）。
?在烘烤切片前應做好排水，烤片溫度高于石蠟熔點5-10℃。
切片常見的16種問題及解決方法
問題1 細胞皺縮和收縮；核“起泡”變大損傷；膠原染色嗜堿性
解決方法：烤箱溫度高于石蠟熔點5-10℃為佳。
問題2 切片卷成致密團
解決方法：①換新刀片；②如果間隙角充分，降低傾刀的斜度。
問題3 切片破碎或切不成片
解決方法：①優化組織處理；②及時更換試劑；③重新脫水補救；或者重取。
問題4 過分的壓縮
原因：①刀片鈍；②組織或石蠟過軟；③用力太猛，速度太快。
解決方法：①換刀片，移刀鋒；②使組織表面變冷，重新切取；③動作輕，用力均勻。
問題5 切片不成連片
原因：①刀刃不鋒利，刀間隙角度大；②蠟塊內組織上下端留蠟邊太少或不整齊，刀邊碎片；③室溫過低或石蠟過硬。
解決方法：①移動刀口或更換刀片，檢查刀的角度，清潔刀片和刀架背面；②在低熔點的石蠟中重新包埋；③提高室內溫度或溫暖蠟塊表面（哈氣等）；④切片厚度適宜（根據組織類型）。
問題6 切片易粘附與組織塊
解決方法：①增加間隙角；②清潔刀邊；③修剪組織塊的邊緣；④濕潤切片機周圍的空氣，地上灑水，開啟加濕器；⑤放置靜電防護器或切片機附近放置干燥板。
問題7 切片條帶彎曲不直
解決方法：①重新修整蠟塊，使上下兩邊平行；②將蠟塊移正，與刀口保持平行；③移動刀片或更換刀片；④修去組織較軟側的蠟塊。
問題8 蠟塊組織脫落
解決方法：①包埋先放石蠟后放組織，速度盡可能快；②切片動作小、勻速。
問題9 組織切片不完整，缺損
解決方法：①組織太大，脫水 不好，取材厚度3mm為佳；②組織在包埋模中均勻鋪平；③熟悉各種組織的切片特點，避免包埋方向的失誤（囊壁、管腔豎直包埋）；④切片方向：軟到硬，易到難，主到次。
問題10 切片過厚
解決方法：①降低切片厚度設置；②定期校準和保養；③使用適合組織類型和密度熔點的石蠟；④常規病理組織切片厚度在3-4μm，淋巴結、脾臟、胸腺、鼻咽組織等含巴細胞成分較多的組織，薄切2-3μm，脂肪5-6μm。
問題11 切片縱裂，損傷，刀痕
解決方法：①更換刀片或移動刀口；②使用面脫鈣方法（20%HCl）；③仔細清潔刀刃以除去多余的石蠟堆積；④如果石蠟中有異物，用干凈的石蠟重新包埋。
問題12 切片厚薄不均勻/跳刀/百葉窗/搓衣板
④切片機部件松動或磨損；⑤組織致密或堅實；⑥主軸伸出太長。
解決方法：①處理過程中減少脫水時間；②更換刀片，減少傾斜度；③哈氣；④均速慢切；⑤確保刀和組織的有關螺絲擰緊夾牢；⑥主軸搖回復原。
問題13 褶皺/折疊
解決方法：①調小刀角度，邊切邊向蠟塊吹氣用10-20%酒精攤片，利用濃度差，水的張力來展片；②檢查攤片水溫，太冷不易展開；太熱會產生褶皺或折疊，組織細胞散開；③更換刀片或移動刀口；④切片厚度是否合適。
問題14 切片裂縫/碎裂
解決方法：①確保固定和處理完全；②在攤片時輕輕延伸蠟帶，去除褶皺和折疊；③降低攤片水溫（通常低于包埋蠟熔點的5-10℃）；④在切片和漂片過程中，小心操作蠟帶；⑤在烘烤切片前應很好的排水。
問題15 柵狀裂和龜裂
解決方法：①優化組織脫水過程；②降低攤片水溫；③切片過程中勿使用冷卻噴霧劑，細胞易縮小；④勻速慢切，邊切邊對蠟塊吹氣。
問題16 切片中有氣泡
解決方法：①保持溫水干凈，無雜質；②切片要干凈無污染；③撈片前將組織下的氣泡趕走。
