免疫磁珠分離技術及應用
一、前沿
免疫磁珠分離技術(Immunomagnetic beads sep—aration techniques,IMB) 是將免疫學反應的高度特異性與磁珠特有的磁響應性相結合的一種新的免疫學技術;是一種特異性強、靈質純化敏度高的免疫學檢測方法和抗原純化手段。是近年來國內外研究較多的一種新的免疫學技術。
目前該項技術在細胞分離、蛋白、免疫學及微生物學檢測等方面均取得了較大的進展,是目前最有推廣價值的技術之一。
二、免疫磁珠分離技術介紹
1、免疫磁珠分離技術原理
利用人工合成的內含鐵成分,可被磁鐵磁力所吸引,外有功能基團,可結合活性蛋白質(抗體)的磁珠,作為抗體的載體。當磁珠上的抗體與相應的微生物或特異性抗原物質結合后,則形成抗原-抗體-磁珠免疫復合物,這種復合物具有較高的磁響應性,在磁鐵磁力的作用下定向移動,使復合物與其他物質分離,而達到分離、濃縮、純化微生物或特異性抗原物質的目的。
2、免疫磁珠法分類
⑴、陽性分離法
磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞
⑵、陰性分離法
磁珠結合不需要的細胞,游離于磁場的細胞為所需細胞。一般而言,陰性分離法的磁珠用量比陽性分離法的大,陽性分離法用的更多。磁性微珠是以金屬離子為核心,外層均勻包裹高分子聚合體的固相顆粒。磁性微珠上既可標記針對某種細胞表面抗原的特異性抗體(直接法); 也可標記羊抗鼠IgG抗體(間接法),使分離細胞的范圍大大擴大。
3、免疫磁性微球的制備
基本技術路線:制成磁性材料的微球,再在微球表面引入活性基團,通過載體表面偶聯反應可將抗體結合到載體上,形成免疫磁性微球。
優質微載體的性能:合適且均一的磁響應強度,較小且均一的粒徑,穩定均一、特異吸附的表面性能。
5、用于分型
免疫磁珠法可被應用于臨床器官移植供受者的快速選配。在高梯度磁場下,用免疫磁珠法分離靜脈或腹腔血中T、B淋巴細胞,并利用分離的淋巴細胞進行HLA-ⅠⅡ類抗原分型。如采用磁珠技術和單抗試劑建立起可在1.5h完成HLA-ⅠⅡ類抗原一類分型的新方法,還可應用免疫磁珠分離技術進行腎移植供受體的HLA分型、探討血液病患者反復血小板輸注的治療效果與HLA之間的相關性。
6、用作靶向釋藥系統的載體
免疫磁性微球作為靶向釋藥系統的載體可使免疫磁性微球上的抗癌藥物更易與癌細胞接觸,服用這種制劑后,在體外適當部位用一適宜強度的磁鐵,將磁性微球引導到體內特定靶區,提高了殺傷癌細胞的效果。很多研究者使用不同的方法制成了針對不同癌細胞的免疫磁性微球,作為靶向釋藥系統的載體并在實驗中證實這種釋藥載體具有良好的功效。